2009年考博生物化學與分子生物學核心十:氨基酸順序分析
來源:互聯(lián)網
2010-04-23 00:00
氨基酸順序分析
蛋白質多肽鏈的氨基酸順序分析,即蛋白質一級結構的測定,主要有以下幾個步驟:??
1.?分離純化蛋白質,得到一定量的蛋白質純品;??
2.?取一定量的樣品進行完全水解,再測定蛋白質的氨基酸組成;??
3.?分析蛋白質的N-端和C-端氨基酸;??
4.?采用特異性的酶(如胰凝乳蛋白酶)或化學試劑(如溴化氰)將蛋白質處理為若干條肽段;??
5.?分離純化單一肽段;??
6.?測定各條肽段的氨基酸順序。一般采用Edman降解法,用異硫氰酸苯酯進行反應,將氨基酸降解后,逐一進行測定;??
7.?至少用兩種不同的方法處理蛋白質,分別得到其肽段的氨基酸順序;??
8.?將兩套不同肽段的氨基酸順序進行比較,以獲得完整的蛋白質分子的氨基酸順序。